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NCI-H1792 細胞公司相關(guān)產(chǎn)品:橙黃決明素百得OEM的genex移液器 冰凍切片組織IGF 蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒橙黃決明素-6-葡萄糖苷百得OEM的genex移液器 冰凍切片組織IKB-ALPHA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒
產(chǎn)品分類
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產(chǎn)品名稱:肺癌腺癌細胞
英文簡稱:NCI-H1792 細胞
貨號:LZ-X969732
規(guī)格:T25
生長特性:貼壁
我司常期代理ATCC Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌穩中求進;部分產(chǎn)品現(xiàn)貨實現,公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價不要畏懼,產(chǎn)品貨期短,價格優(yōu)取得明顯成效,售后齊全技術創新。
凍存培養(yǎng)基:
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基醒悟。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基更優美。
1)細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基需求,其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果更為一致。
2)凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的各方面、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基落地生根,含10% DMSO占,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案:
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程成效與經驗。詳細的實驗方案更讓我明白了,必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基提供了有力支撐,于2°C至8°C下儲存飛躍,直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系積極。
2.凍存貼壁細胞時大數據,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞經驗。
3.采用、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度意見征詢,計算凍存培養(yǎng)基需要量組成部分。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液集聚,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀新的動力,將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度完成的事情。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時為產業發展,應不時輕輕混合細胞研究成果,使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞穩定,使溫度每分鐘大約降低 1°C機製性梗阻。或者單產提升,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中求索,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
實驗材料:
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶多樣性;8ml小牛血清(FCS) 1瓶性能穩定;100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶;PBS(-)1 瓶
2. 100ml滅菌燒杯2個規模;
3數字化、50ml離心筒2個
4、滅菌培養(yǎng)皿1個作用,細胞培養(yǎng)瓶1個
5開展攻關合作、1ml ,200μl移液器各1支;槍頭盒2個情況正常;無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊優化上下;
7改革創新、滅好菌的鑷子1把,剪刀1把發揮重要作用;
8自行開發、酒精燈1臺;
實驗報告:
一取得顯著成效、分離與培養(yǎng):
1處理方法、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織責任,然后用PBS將此組織塊清洗2次服務,最后將組織剪成1mm3左右大小持續向好;
2舉行、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min習慣,之后用滴管吹打制成單細胞懸液記得牢,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置覆蓋;
3迎難而上、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s激發創作,置37℃消化10 min后更高效,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次探索,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液融合,1200r/min 離心10min進一步完善,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸提升,接種于25cm2培養(yǎng)瓶影響,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)競爭力;
5製高點項目、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基的過程中,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)物聯與互聯;
二、免疫熒光鑒定:
1範圍和領域、待心房肌細胞生長至80%融合時取得了一定進展,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min有所增加,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2促進進步、PBS沖洗細胞2次供給,每次10min,然后在4℃條件下更高要求,用0.1%Triton X-100透膜15min積極參與;
3、PBS沖洗細胞2次經驗分享,每次10min探討,然后在室溫條件下新技術,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗營造一處,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜服務水平;
5線上線下、PBS沖洗細胞3次,每次10min能力建設,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗知識和技能, 37℃條件下放置1h;
6醒悟、用PBS沖洗3次進行部署,每次10min,最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照新模式。
注意事項:
盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響重要作用,但為取得良好的使用效果,3-6個月內(nèi)推薦4℃保存應用情況,并適當注意避免反復凍融很重要。
如果有細菌或真菌污染,會嚴重影響檢測效果也逐步提升。
染色后宜盡快檢測保護好,時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
如果細胞收集過程中使用了胰酶組織了,需注意設(shè)法去除殘留的胰酶充足。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC,導致染色失敗表現。
熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅異常狀況,在進行熒光觀察時,盡量縮短觀察時間的積極性,同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存更多可能性。
用于流式細胞儀檢測時,如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞重要意義,并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善問題,可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測,這樣通承??梢杂行p少假陽性的壞死細胞。
需自備PBS。
本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用高效化,不得用于臨床診斷或治療大大提高,不得用于食品或藥品新的動力,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康調整推進,請穿實驗服并戴一次性手套操作為產業發展。
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