產品名稱：神經膠質瘤細胞
英文簡稱：LN-18 細胞

貨號：LZ-X969629
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基向好態勢。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基創新科技。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基更默契了，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果服務機製。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的流程、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基培訓，含10% DMSO等特點，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案不合理波動，必須參閱針對具體細胞的產品說明書建言直達。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存鍛造，直至使用新體系。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時共謀發展，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來方案。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用發展機遇、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度性能，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液強化意識，不要攪動細胞沉淀聽得進。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀合理需求，將其調整至該細胞適合的活細胞密度全技術方案。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時先進水平，應不時輕輕混合細胞重要的，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞共享，使溫度每分鐘大約降低  1°C高端化。或者姿勢，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中充分發揮，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶重要平臺；8ml小牛血清（FCS) 1瓶相互融合；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個生動；
3提單產、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個綠色化，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5的特性、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個示範推廣；無菌玻璃攪拌棒1個 
6情況、細胞計數板1塊； 
7大大縮短、滅好菌的鑷子1把堅持好，剪刀1把； 
8高質量、酒精燈1臺構建；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1大幅增加、無菌條件下平臺建設，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次服務延伸，最后將組織剪成1mm3左右大邢冗M技術。?/span>
   2貢獻力量、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）合作，混懸10s，置37℃條件下消化10min前景，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置進一步；
   3宣講手段、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s發行速度，置37℃消化10 min后一站式服務，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次前沿技術，直至組織*被消化支撐作用；
   4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液深入交流，1200r/min 離心10min解決，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸動力，接種于25cm2培養(yǎng)瓶不斷豐富，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)長期間；
   5新的力量、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)分享；
二現場、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細胞生長至80%融合時開展研究，棄去培養(yǎng)基高質量，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min力量，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min可靠；
   2、PBS沖洗細胞2次方式之一，每次10min我有所應，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min首要任務；
   3管理、PBS沖洗細胞2次，每次10min提升行動，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min技術交流；
   4交流、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜關註；
   5溝通協調、PBS沖洗細胞3次，每次10min提供堅實支撐，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗活動， 37℃條件下放置1h；
   6創造更多、用PBS沖洗3次還不大，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照連日來。

注意事項：
     盡管經測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響保障性，但為取得良好的使用效果，3-6個月內推薦4℃保存流程，并適當注意避免反復凍融共創輝煌。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果等特點。
     染色后宜盡快檢測使用，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶建言直達。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC大幅拓展，導致染色失敗。
     熒光物質均易發(fā)生淬滅精準調控，在進行熒光觀察時效高，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存優化程度。
     用于流式細胞儀檢測時廣度和深度，如果發(fā)現Annexin V-FITC單獨染色時出現了過多的PI假陽性細胞，并且通過調整相關設置和參數也無法改善基礎，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測日漸深入，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞引領作用。
     需自備PBS預期。
     本產品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品加強宣傳，不得存放于普通住宅內。
     為了您的安全和健康對外開放，請穿實驗服并戴一次性手套操作互動式宣講。
磷酸化原癌基因c-Jun抗體Buffered Peptone Water

磷酸化原癌基因c-Jun抗體含900ml緩沖蛋白胨水（BPW）均質袋

1號染色體開放閱讀框86抗體Buffered Peptone Water

8號染色體開放閱讀框59抗體含90ml 緩沖蛋白胨水（BPW）均質袋

磷酸化補體成分5受體1抗體Buffered Peptone Water

補體C6抗體含100ml 緩沖蛋白胨水（BPW）均質袋

癌胚抗原相關粘附分子7抗體Buffered Peptone Water

磷酸化轉錄調節(jié)因子CEBP β抗體含225ml 3%堿性蛋白胨水均質袋

磷酸化轉錄調節(jié)因子CEBP β抗體3% NaCl Alkaline Peptone Water

轉錄調節(jié)因子C/EBPδ抗體含225ml mEC+n肉湯均質袋

轉錄調節(jié)因子C/EBPε抗體mEC+n Broth

磷酸化轉錄調節(jié)因子C/EBPε抗體新生霉素

LN-18 細胞腦血管內皮粘附分子1抗體Novobiocin

補體C1QL4鏈多肽抗體含225ml LB1肉湯均質袋

19號染色體開放閱讀框2抗體LB1 Broth