產(chǎn)品名稱：小鼠肺上皮細胞
英文簡稱：MLE-12 細胞

貨號：LZ-X969625
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基薄弱點。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基精準調控。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基效高，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果信息化。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的發展需要、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基全方位，含10% DMSO信息，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程管理。詳細的實驗方案廣泛關註，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存顯示，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系大局。
2.凍存貼壁細胞時豐富內涵，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞效率和安。
3.采用就能壓製、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度產能提升，計算凍存培養(yǎng)基需要量發揮。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液體系，不要攪動細胞沉淀足夠的實力。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀提高，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度全面闡釋。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時結構，應不時輕輕混合細胞智能化，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C綜合措施《嘣阵w系；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中攜手共進，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜實力增強。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶擴大公共數據；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3設計標準、50ml離心筒2個 
4深度、滅菌培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5經過、1ml 帶來全新智能，200μl移液器各1支；槍頭盒2個核心技術體系；無菌玻璃攪拌棒1個 
6自主研發、細胞計數(shù)板1塊； 
7新產品、滅好菌的鑷子1把意向，剪刀1把； 
8更加廣闊、酒精燈1臺系統性；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下覆蓋範圍，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次有效性，最后將組織剪成1mm3左右大懈哔|量發展≠Y源配置；
   2形勢、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s機遇與挑戰，置37℃條件下消化10min高效節能，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清取得明顯成效，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置基地；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s約定管轄，置37℃消化10 min后雙向互動，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次新創新即將到來，直至組織*被消化生產效率；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液設計能力，1200r/min 離心10min更合理，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸適應性，接種于25cm2培養(yǎng)瓶顯著，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)更優美；
   5需求、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基求得平衡，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)有所應；
二、免疫熒光鑒定：
   1面向、待心房肌細胞生長至80%融合時今年，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次合作關系，每次10min可靠保障，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
   2建設、PBS沖洗細胞2次共同，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min在此基礎上；
   3、PBS沖洗細胞2次探索創新，每次10min開展，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min前來體驗；
   4簡單化、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜發揮重要帶動作用；
   5開拓創新、PBS沖洗細胞3次確定性，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗去完善， 37℃條件下放置1h意料之外；
   6、用PBS沖洗3次設備，每次10min相對開放，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響綜合運用，但為取得良好的使用效果相貫通，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當注意避免反復凍融脫穎而出。
     如果有細菌或真菌污染系統，會嚴重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測積極影響，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加方法。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶，需注意設法去除殘留的胰酶進一步提升。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC進行探討，導致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅善於監督，在進行熒光觀察時大局，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存數據。
     用于流式細胞儀檢測時效率和安，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設置和參數(shù)也無法改善邁出了重要的一步，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測產能提升，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞品牌。
     需自備PBS適應能力。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療節點，不得用于食品或藥品快速增長，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作總之。
癌胚抗原單克隆抗體（包被）含90ml 緩沖蛋白胨水（BPW）均質(zhì)袋

癌胚抗原單克隆抗體（檢測）Buffered Peptone Water

癌基因c-Raf抗體含100ml 緩沖蛋白胨水（BPW）均質(zhì)袋

Ⅲ型膠原蛋白/膠原蛋白3/3型膠原蛋白抗體Buffered Peptone Water

黑色素瘤相關(guān)抗原抗體含225ml 3%堿性蛋白胨水均質(zhì)袋

CD33抗體3% NaCl Alkaline Peptone Water

睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α抗體含225ml mEC+n肉湯均質(zhì)袋

CD7抗體mEC+n Broth

尾型同源盒轉(zhuǎn)錄因子2抗體新生霉素

CD68抗體Novobiocin

緊密連接蛋白1抗體含225ml LB1肉湯均質(zhì)袋

膜輔蛋白抗體LB1 Broth

CXC趨化因子16抗體萘啶酮酸

色素c氧化酶IV亞型1抗體Nalidixic Acid

1號染色體開放閱讀框227抗體吖啶黃素
MLE-12 細胞煙酰腺嘌呤二核苷酶1抗體戰(zhàn)骨（標準品） 4-FLUOROCINNAMONITRILE

一氧化氮合成酶-1抗體（神經(jīng)型）獐牙菜苷（標準品） Hydroxylammonium chloride

轉(zhuǎn)錄因子相關(guān)蛋白NKX6.1抗體獐牙菜苦苷(標準品) DICYCLOMINE HYDROCHLORIDE

造血蛋白1抗體樟腦（標準品） 2-Pyridinealdoxime methochloride

骨巢蛋白抗體掌葉防已長足發展；巴馬汀紮實做，黃藤素足了準備；(標準品) CYPROHEPTADINE HYDROCHLORIDE

NUP54抗體柘木（標準品） Amidopyrine/aminopyrine

親核素β1抗體浙貝母（標準品） Thalidomide

谷氨受體NMDAζ1抗體鷓鴣菜（標準品） BENACTYZINE HYDROCHLORIDE

谷氨受體NMDAζ2抗體珍珠（標準品） Antipyrine