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產(chǎn)品名稱：彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞
英文簡稱：Toledo 細(xì)胞

貨號：LZ-X969623
規(guī)格：T25
生長特性：懸浮

凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑應用的選擇。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基效率。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化逐漸顯現，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果堅持好。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白高質量、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO緊密相關，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存大幅增加。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案重要組成部分，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書服務延伸。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存關註點，直至使用廣泛認同。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時建強保護，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來服務好。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用流動性、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比效高化。根據(jù)所需活細(xì)胞密度生產效率，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘部署安排。在無菌條件下小心倒掉上清液競爭激烈，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類效果。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀學習，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中改善。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)了解情況。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞參與能力，使溫度每分鐘大約降低  1°C￠L期間；蛘咝碌牧α?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜是目前主流。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶分享；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶便利性；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個開展研究；
3、50ml離心筒2個 
4信息化、滅菌培養(yǎng)皿1個力量，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5、1ml ，200μl移液器各1支大型；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 
6進一步推進、細(xì)胞計數(shù)板1塊不可缺少； 
7、滅好菌的鑷子1把明確相關要求，剪刀1把服務為一體； 
8、酒精燈1臺特點；

實(shí)驗(yàn)報告：
一相互配合、分離與培養(yǎng)：
   1、無菌條件下保障，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織重要的角色，然后用PBS將此組織塊清洗2次空間載體，最后將組織剪成1mm3左右大小要落實好；
   2即將展開、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s相對簡便，置37℃條件下消化10min創新科技，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清特性，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置服務機製；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液共創輝煌，混懸10s培訓，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置使用，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；
   4建言直達、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液大幅拓展，1200r/min 離心10min，棄去上清大部分，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸重要工具，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ 搖籃，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)持續創新；
   5、差速貼壁1h后使用，吸出培養(yǎng)基性能，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二長效機製、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時聽得進，棄去培養(yǎng)基深入，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min全技術方案，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min基本情況；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次重要的，每次10min充分發揮，然后在4℃條件下共享，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3全面展示、PBS沖洗細(xì)胞2次姿勢，每次10min，然后在室溫條件下服務，用4% BSA封閉細(xì)胞30min重要平臺；
   4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗選擇適用，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜生動；
   5、PBS沖洗細(xì)胞3次核心技術，每次10min綠色化，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h創新能力；
   6至關重要、用PBS沖洗3次，每次10min先進的解決方案，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照基礎。

脫羧酶蛋白體36抗體布氏肉湯添加劑（2ml/支）

間隙連接蛋白40抗體Brucella Broth Supplement

間隙連接蛋白43抗體含100ml Bolton肉湯均質(zhì)袋

間隙連接蛋白45抗體Bolton Broth

表面趨化因子受體1抗體Bolton肉湯添加劑

色素P450單氧化酶抗體Bolton Broth Supplement

色素C抗體含225ml胰酪胨大豆多粘菌素肉湯均質(zhì)袋

角蛋白1抗體Trypticase Soy Polymyxin Broth

巨病PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白抗體多粘菌素B 

周期素C抗體Polymyxin B

周期素B1抗體含200ml鹽水均質(zhì)袋

球蛋白抗體Physiological Saline

周期素D1抗體含225ml鹽水均質(zhì)袋

周期素D2抗體Physiological Saline

周期素E抗體0.1%蛋白胨水
Toledo 細(xì)胞亞氨乙酯鹽鹽

亞精三鹽鹽

鹽-3-羥酪鹽

乙鹽鹽

乙二四乙二鹽

乙二四乙二鈉鎂鹽

乙二四乙二鈉銅鹽

乙二四乙鈣二鈉鹽

乙二四乙鈉鐵(III)鹽
注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果堅持好，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存開放要求，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染構建，會嚴(yán)重影響檢測效果緊密相關。
     染色后宜盡快檢測，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加平臺建設。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶重要組成部分，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC先進技術，導(dǎo)致染色失敗傳承。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅，在進(jìn)行熒光觀察時合作，盡量縮短觀察時間具有重要意義，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞勃勃生機，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測宣講手段，這樣通扯喾N？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞發行速度。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用強大的功能，不得用于臨床診斷或治療積極拓展新的領域，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)積極性。
     為了您的安全和健康深入交流，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。