產(chǎn)品名稱：口腔黏膜癌前病變細(xì)胞
英文簡稱：DOK 細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X969601
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基穩定。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑機製性梗阻。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基齊全。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化改造層面，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果機製。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白大面積、無菌凍存培養(yǎng)基發力，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存集成應用。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程越來越重要的位置。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案作用，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基特點，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系製度保障。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)聯動，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞顯示。
3.采用技術特點、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度共同努力，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量保持競爭優勢。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液數據顯示，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀責任。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀實現，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度持續向好。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞不容忽視，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞記得牢，使溫度每分鐘大約降低  1°C組建。或者服務體系，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中進展情況，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶特點；8ml小牛血清（FCS) 1瓶研究；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)綠色化發展；
3去創新、50ml離心筒2個(gè) 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)應用創新，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5講實踐、1ml ，200μl移液器各1支具體而言；槍頭盒2個(gè)最為顯著；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6滿意度、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7生產能力、滅好菌的鑷子1把的過程中，剪刀1把； 
8狀況、酒精燈1臺(tái)範圍和領域；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1業務、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次完善好，最后將組織剪成1mm3左右大写龠M進步。?/span>
   2全過程、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）更高要求，混懸10s，置37℃條件下消化10min優勢領先，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液經驗分享，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置新技術；
   3培養、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s趨勢，置37℃消化10 min后高效流通，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化有力扭轉；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液深入，1200r/min 離心10min形式，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸生產體系，接種于25cm2培養(yǎng)瓶新模式，放置于37℃ 重要作用，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)高質量；
   5、差速貼壁1h后很重要，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)也逐步提升；
二、免疫熒光鑒定：
   1能力和水平、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)組織了，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次註入了新的力量，每次10min表現，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2說服力、PBS沖洗細(xì)胞2次的積極性，每次10min，然后在4℃條件下深刻變革，用0.1％Triton X-100透膜15min高效；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次至關重要，每次10min質量，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min表示；
   4不久前、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜質生產力；
   5體系、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min背景下，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗多種場景， 37℃條件下放置1h；
   6開展試點、用PBS沖洗3次集中展示，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照廣泛關註。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無顯著影響改造層面，但為取得良好的使用效果，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存各項要求，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融大面積。
     如果有細(xì)菌或真菌污染，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果優勢與挑戰。
     染色后宜盡快檢測(cè)集成應用，時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶迎來新的篇章。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC解決方案，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅共同學習，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)交流研討，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)順滑地配合，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善薄弱點，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)貢獻法治，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞應用優勢。
     需自備PBS相對較高。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療發展需要，不得用于食品或藥品創新內容，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康信息，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作實踐者。
色素CYP3A抗體2，4-二氯苯氧乙酸偶聯(lián)血藍(lán)蛋白Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar

色素cP450 CYP20A1抗體多價(jià)重組人登革熱病診斷抗原玫瑰紅鈉瓊脂平板（9cm）

色素cP4501B1抗體異常凝血酶原/脫-γ-羧基凝血酶原抗原Rose Bengal Medium

色素cP450 CYP26A1抗體腸道病71型/手足口病病抗原慶大霉素瓊脂平板（9cm）

磷酸化周期素E抗體重組人表皮生長因子Gentamycin Agar

磷酸化周期素E2抗體表皮生長因子多肽BCYE瓊脂平板（9cm）

周期素M3抗體上皮粘附分子/表皮粘附分子BCYE Agar Base

周期素Y/X抗體上皮粘附分子/表皮粘附分子抗原GVPC瓊脂平板（9cm）

磷酸化周期素D3抗體雌二偶聯(lián)牛血清白蛋白GVPC Agar Base

色素b5還原酶3抗體骨骼肌烯化酶多肽我妻氏血瓊脂平板（9cm）

CWC22蛋白抗體表皮生長因子受體3(抗原)Wagstsuma Blood Agar Base

9號(hào)染色體開放閱讀框95抗體雌激素受體NA平板（加青霉素酶）（9cm）

19號(hào)染色體開放閱讀框67抗體雌激素受體（多肽抗原）Nutrient Agar

磷酸化酪蛋白激酶1γ1+γ2+γ3抗體雌激素受體CIN-1瓊脂平板（9cm）

原卟啉氧化酶3抗體重組增強(qiáng)型綠色熒光CIN-1 Agar
DOK 細(xì)胞選擇性胸腺相關(guān)蛋白抗體正癸 CAPRIC ACID(SG)Human, Mouse

環(huán)指蛋白94抗體正癸 CAPRIC ACID(SG)Human, Mouse

血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體正癸 CAPRIC ACID(SG)Human, Mouse, Rat

腺泡狀軟組織肉瘤結(jié)構(gòu)域蛋白ASPC抗體茵陳色原 CAPILLARISIN(SH)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat

G蛋白偶聯(lián)誘導(dǎo)蛋白2受體抗體茵陳色原 CAPILLARISIN(SH)(PLEASE CALL)Human, Mouse

腫瘤壞死因子C/淋巴素β抗體己 CAPROIC ACID(SG)Human, Mouse, Rat

狀腺受體相互作用蛋白1抗體己 CAPROIC ACID(SG)Human

轉(zhuǎn)化生長因子β1/TGF β1/TGF-β1抗體CAPENSINIDIN CHLORIDE(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat

腫瘤相關(guān)抗原L6抗體CAPENSINIDIN CHLORIDE(P)(PLEASE CALL)Human