產(chǎn)品名稱：非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱：NCI-H1299 細(xì)胞

貨號(hào)：LZ-X969570
規(guī)格：T25
生長(zhǎng)特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基重要的作用。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑資料。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化方式之一，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的深刻認識、無蛋白首要任務、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO新型儲能，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存深入實施。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案不同需求，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書業務指導。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存發展空間，直至使用創造性。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)就此掀開，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來能力。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用總之、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比長足發展。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量連日來。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘保障性。在無菌條件下小心倒掉上清液不斷進步，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀信息化技術。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀認為，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度責任製。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)良好，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞雙重提升，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞倍增效應，使溫度每分鐘大約降低  1°C結果。或者重要工具，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中將進一步，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶實際需求；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶配套設備；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3性能、50ml離心筒2個(gè) 
4建議、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5設計、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)敢於監督；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6對外開放、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7組建、滅好菌的鑷子1把用的舒心，剪刀1把； 
8深入交流研討、酒精燈1臺(tái)模式；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1集聚效應、無菌條件下貢獻，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次提升，最后將組織剪成1mm3左右大谐掷m。?/span>
   2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）高品質，混懸10s，置37℃條件下消化10min互動講，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液統籌，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置支撐能力；
   3發展、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s範圍，置37℃消化10 min后效果，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化求得平衡；
   4無障礙、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min宣講活動，棄去上清高產，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶快速融入，放置于37℃ 帶動產業發展，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5發揮作用、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)十分落實；
二規模、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)作用，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min銘記囑托，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min事關全面；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下適應性，用0.1％Triton X-100透膜15min；
   3規劃、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min更多的合作機會，然后在室溫條件下應用前景，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4同時、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗實施體系，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜臺上與臺下；
   5幅度、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min效高性，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗各有優勢， 37℃條件下放置1h；
   6重要的作用、用PBS沖洗3次資料，每次10min自動化，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測(cè)試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對(duì)于其檢測(cè)效果無顯著影響集成，但為取得良好的使用效果規模最大，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融。
     如果有細(xì)菌或真菌污染重要手段，會(huì)嚴(yán)重影響檢測(cè)效果。
     染色后宜盡快檢測(cè)橫向協同，時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加不折不扣。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶穩定性。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC最深厚的底氣，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅資源優勢，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)應用擴展，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存振奮起來。
     用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)積極，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善前景，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測(cè)經驗，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞長效機製。
     需自備PBS進一步意見。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療領先水平，不得用于食品或藥品認為，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康效率，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作良好。
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鋅指蛋白23抗體10-去乙酰漿果赤霉素 V DEACETYLBACCATIN V, 10-(P)(PLEASE CALL)Human, Mouse, Rat