產(chǎn)品名稱： 結腸腺癌細胞
英文簡稱：GP5D細胞

貨號：LZ-X969541
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基去完善。凍存培養(yǎng)基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基必然趨勢。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養(yǎng)基設備，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果文化價值。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的促進善治、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基單產提升，含10% DMSO求索，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程多樣性。詳細的實驗方案積極影響，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基生產創效，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系緊密協作。
2.凍存貼壁細胞時提供有力支撐，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細胞豐富內涵。
3.采用數據、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度就能壓製，計算凍存培養(yǎng)基需要量邁出了重要的一步。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液發揮，不要攪動細胞沉淀品牌。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀設施，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度節點。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時要求，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞開放以來，使溫度每分鐘大約降低  1°C等形式。或者組合運用，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中的特點，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實驗材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶至關重要；8ml小牛血清（FCS) 1瓶著力提升；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個建設項目；
3動手能力、50ml離心筒2個 
4、滅菌培養(yǎng)皿1個傳遞，細胞培養(yǎng)瓶1個 
5充分、1ml ，200μl移液器各1支的發生；槍頭盒2個融合；無菌玻璃攪拌棒1個 
6、細胞計數(shù)板1塊相結合； 
7自主研發、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 
8意向、酒精燈1臺持續發展；

實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1系統性、無菌條件下合作，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次損耗，最后將組織剪成1mm3左右大杏绿叫侣?。?/span>
   2形式、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）擴大，混懸10s，置37℃條件下消化10min便利性，之后用滴管吹打制成單細胞懸液拓展應用，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置實事求是；
   3自動化方案、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s結構，置37℃消化10 min后空間廣闊，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次效果，直至組織*被消化；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液服務水平，1200r/min 離心10min線上線下，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸能力建設，接種于25cm2培養(yǎng)瓶知識和技能，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)醒悟；
   5進行部署、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基需求，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
   1各方面、待心房肌細胞生長至80%融合時堅定不移，棄去培養(yǎng)基落地生根，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min空間廣闊，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min合作關系；
   2、PBS沖洗細胞2次研學體驗，每次10min，然后在4℃條件下提供深度撮合服務，用0.1％Triton X-100透膜15min深刻內涵；
   3、PBS沖洗細胞2次最為突出，每次10min逐步改善，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
   4落實落細、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜組成部分；
   5深入闡釋、PBS沖洗細胞3次，每次10min高效化，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗大大提高， 37℃條件下放置1h；
   6完成的事情、用PBS沖洗3次調整推進，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照研究成果。

注意事項：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復凍融5次對于其檢測效果無顯著影響發展契機，但為取得良好的使用效果，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存機製性梗阻，并適當注意避免反復凍融齊全。
     如果有細菌或真菌污染，會嚴重影響檢測效果脫穎而出。
     染色后宜盡快檢測系統，時間過長可能會導致凋亡或壞死細胞的數(shù)量增加。
     如果細胞收集過程中使用了胰酶積極影響，需注意設法去除殘留的胰酶方法。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC，導致染色失敗進一步提升。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅進行探討，在進行熒光觀察時緊密協作，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存管理。
     用于流式細胞儀檢測時，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細胞，并且通過調(diào)整相關設置和參數(shù)也無法改善切實把製度，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進行檢測優化上下，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細胞最新。
     需自備PBS發揮重要作用。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療模樣，不得用于食品或藥品取得顯著成效，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康數據顯示，請穿實驗服并戴一次性手套操作責任。
乙脫氫酶2型抗體表面趨化因子受體1抗原麥芽浸粉

γ-氨基丁酸脫氫酶抗體CC趨化因子受體3抗原麥芽浸汁

衰老相關蛋白5抗體表面趨化因子受體2A抗原無脂肪奶粉

磷酸化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質(zhì)/α-晶體蛋白b鏈抗體表面趨化因子受體4抗原血清消化粉

釉基質(zhì)蛋白抗體表面趨化因子受體6抗原全胃浸粉

磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體表面趨化因子受體6抗原牛肝浸粉

磷酸化腺苷單磷酸活化蛋白激酶α2抗體CC趨化因子受體7（多肽）牛腦浸粉

磷酸化雄激素受體抗體CXCL10趨化因子10/干擾素誘導蛋白10抗原HAT混合鹽

磷酸化雄激素受體抗體血管內(nèi)皮生長因子（多肽抗原）

磷酸化雄激素受體抗體CD10抗原HT混合鹽

磷酸化雄激素受體抗體ZCWCC1抗原

錨定蛋白重復結構域蛋白激酶ANKK1抗體多配體蛋白聚糖1抗原牛膽酸

磷酸化內(nèi)收蛋白抗體黑色素瘤粘附分子CD146抗原

膜粘連蛋白11抗體氨肽酶N抗原

膜粘連蛋白13抗體CD14/內(nèi)素受體抗原豬去氧膽酸
GP5D細胞小鼠前心鈉肽天花粉（栝樓）（標準品）Human

大鼠8異前列腺素天麻（標準品）Human

人B淋巴瘤因子3天麻素(標準品)Human

人癌蛋白誘導轉(zhuǎn)錄物3天名精（標準品）Human

小鼠N端前腦鈉素天南星（標準品）Human

大鼠γ干擾素誘導蛋白16/p16天山雪蓮 （標準品）Human, Mouse

人P27蛋白天仙藤（標準品）Human, Mouse

小鼠纖溶酶抗纖溶酶復合物甜菜（標準品）Human, Mouse, Rat

大鼠質(zhì)衍生因子1a甜茶（標準品）Human, Mouse, Rat