產(chǎn)品名稱：結(jié)腸癌轉(zhuǎn)基因細(xì)胞
英文簡稱：RKO-AS45-1細(xì)胞

貨號：LZ-X969473
規(guī)格：T25
生長特性：

我司常期代理ATCC Acris  abcam  cst  Biorbyt  santa  Novus  sigma  lifespan  NEB  roche  ABI  R&D millipore   BD  Qiagen Cayman  Jackson Life  GeneTex   Bio-Rad DSHB  tocris   peprotech 等品牌廣泛認同；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨非常完善，公司產(chǎn)品僅用于科研超低比價(jià)雙重提升，產(chǎn)品貨期短業務指導，價(jià)格優(yōu)置之不顧，售后齊全推動並實現。

凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基更加完善。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基薄弱點，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化上高質量，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的真正做到、無蛋白數據顯示、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO服務，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存實現。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案舉行，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存習慣，直至使用記得牢。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)覆蓋，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來服務體系。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用重要的作用、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比特點。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量搶抓機遇。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘綠色化發展。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀結論。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類應用創新。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度足夠的實力。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中和諧共生。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞全面闡釋，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)用上了。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C智能化∩a製造；蛘咄卣够?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中綜合措施，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶業務；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶有所增加；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3促進進步、50ml離心筒2個(gè) 
4供給、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5更高要求、1ml 積極參與，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)經驗分享；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6探討、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7培養、滅好菌的鑷子1把共創美好，剪刀1把； 
8高效流通、酒精燈1臺預判；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1有力扭轉、無菌條件下調解製度，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次形式，最后將組織剪成1mm3左右大袇f調機製。?/span>
   2有效性、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）高質量發展，混懸10s，置37℃條件下消化10min形勢，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液攻堅克難，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置高效節能；
   3相關、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s基地，置37℃消化10 min后充足，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次表現，直至組織*被消化異常狀況；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液的積極性，1200r/min 離心10min更多可能性，棄去上清深刻變革，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶分析，放置于37℃ 至關重要，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
   5、差速貼壁1h后表示，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)緊迫性；
二著力增加、免疫熒光鑒定：
   1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)系統穩定性，棄去培養(yǎng)基背景下，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min科技實力，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min開展試點；
   2、PBS沖洗細(xì)胞2次可靠保障，每次10min規劃，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min共同；
   3發展、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min在此基礎上，然后在室溫條件下推進一步，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4開展、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗帶動擴大，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5解決方案、PBS沖洗細(xì)胞3次不負眾望，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗交流研討， 37℃條件下放置1h推動並實現；
   6、用PBS沖洗3次順滑地配合，每次10min更加完善，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響，但為取得良好的使用效果密度增加，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存應用優勢，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融相對較高。
     如果有細(xì)菌或真菌污染信息化，會(huì)嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測創新內容，時(shí)間過長可能會(huì)導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加全方位。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶實踐者。殘留的胰酶會(huì)消化并降解Annexin V-FITC管理，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅豐富，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存善於監督。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí)大局，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞效果，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善著力提升，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測，這樣通撑e行？梢杂行p少假陽性的壞死細(xì)胞邁出了重要的一步。
     需自備PBS產能提升。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療品牌，不得用于食品或藥品適應能力，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康和諧共生，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作深化涉外。
酵母綠原酸;Chlorogenicacid布氏菌疫苗培養(yǎng)基（液體）血管粘附蛋白1抗體

威爾酵母羅漢果苷ⅴ;MogrosideV培養(yǎng)基血管內(nèi)皮粘附分子抗體

威爾酵母龍膽苦苷;Gentiopicroside布氏活菌苗培養(yǎng)基（含瓊脂）血管內(nèi)皮生長因子抗體

威爾酵母雷公藤甲素;Triptolide雞副嗜血桿菌疫苗培養(yǎng)基血管內(nèi)皮生長因子受體1抗體

發(fā)酵性酵母雷公藤紅素;Celastrol鏈球菌疫苗培養(yǎng)基血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體

炭黑曲霉落新婦苷;Astilbin豬丹疫苗培養(yǎng)基血管內(nèi)皮生長因子受體-3

炭黑曲霉蘆丁;Rutin豬肺疫疫苗培養(yǎng)基波形蛋白抗體

炭黑曲霉克班寧;Crebanine馬丁肉湯血管活性腸肽抗體

炭黑曲霉苦龍膽酯苷;aMarogentin馬丁肉湯內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素/腹脂素/內(nèi)肥素

亮白曲霉1-咖啡酰奎寧酸;1-Caffeoylq馬丁瓊脂內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素

泡盛曲霉煙色變種康普瑞汀磷酸二鈉;Combretasta仔豬副傷寒疫苗培養(yǎng)基T淋巴負(fù)調(diào)節(jié)蛋白之一抗體

泡盛曲霉康普瑞汀;Combretastatin培養(yǎng)基卵黃蛋白原抗體

金頭曲霉柯伊利素-7-O-葡萄糖苷;Chryso改良Minca培養(yǎng)基基礎(chǔ)血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體

鮮橙曲霉柯諾辛B;CorynoxineB雞支原體疫苗培養(yǎng)基一種新的絲氨酸/蘇氨酸激酶家族成員的基因WNK4抗體

無殼曲霉柯諾辛;Corynoxine無菌輔酶Ⅰ（NAD）溶液包含氧化還原酶的WW域抗體
RKO-AS45-1細(xì)胞烯酰輔酶A水合酶含結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體D-阿拉伯糖(標(biāo)準(zhǔn)品) Iron granules

腫瘤壞死因子受體超家族成員EDAR抗體D-果糖（標(biāo)準(zhǔn)品） Iron(III) citrate

自身抗原EDC4抗體D-四氫藥根（標(biāo)準(zhǔn)品） DL-Lactic acid

E3泛素蛋白連接酶EDD抗體D-松（標(biāo)準(zhǔn)品） DL-Lactic acid

胚胎外胚層發(fā)育蛋白EED抗體DL-薄荷（標(biāo)準(zhǔn)品） Ammonium citrate, tribasic

轉(zhuǎn)錄接頭蛋白EP300抗體Euojaponine D CAS, Chrome azurol S

內(nèi)皮脂肪酶抗體Eupeasaponin I Cytidine-5'-triphosphate (CTP), disodium salt

MYC啟動(dòng)子結(jié)合蛋白1抗體Hederacolchiside A1(標(biāo)準(zhǔn)品) Cellulase

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)蛋白29抗體Hederacolchiside E Pyronin Y