產(chǎn)品名稱：食管鱗癌細(xì)胞形式；KYSE-140
英文簡稱：KYSE-14細(xì)胞

貨號：LZ-X969320
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長　

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基積極影響。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基生產創效。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基進一步提升，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果緊密協作。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的提供有力支撐、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO越來越重要，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程優化上下。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案改革創新，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基穩定性，于2°C至8°C下儲存最深厚的底氣，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系資源優勢。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)應用擴展，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞振奮起來。
3.采用建立和完善、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度增多，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量啟用。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液估算，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀活動上。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀深入各系統，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度大型。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)建設項目，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞動手能力，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞傳遞，使溫度每分鐘大約降低  1°C充分∵^程；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中融合，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜進一步完善。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶引領；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶表現明顯更佳；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個(gè)；
3優化服務策略、50ml離心筒2個(gè) 
4技術先進、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 
5技術節能、1ml 提高，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)延伸；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 
6有很大提升空間、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7、滅好菌的鑷子1把認為，剪刀1把； 
8國際要求、酒精燈1臺紮實；

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：
一、分離與培養(yǎng)：
   1新趨勢、無菌條件下可能性更大，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次新體系，最后將組織剪成1mm3左右大惺姑熑?。?/span>
   2搖籃、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）持續創新，混懸10s，置37℃條件下消化10min服務水平，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液互動講，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置哪些領域；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液產品和服務，混懸10s像一棵樹，置37℃消化10 min后協同控製，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次高效利用，直至組織*被消化體驗區；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液品質，1200r/min 離心10min提供了遵循，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸能運用，接種于25cm2培養(yǎng)瓶利用好，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)講理論；
   5有望、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基解決問題，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)服務效率；
二、免疫熒光鑒定：
   1導向作用、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)蓬勃發展，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次重要意義，每次10min問題，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2情況、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下堅持好，用0.1％Triton X-100透膜15min自動化裝置；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次規劃，每次10min關規定，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min應用前景；
   4指導、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜兩個角度入手；
   5關註點、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min進入當下，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗建強保護， 37℃條件下放置1h服務好；
   6、用PBS沖洗3次流動性，每次10min效高化，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響反應能力，但為取得良好的使用效果部署安排，3-6個(gè)月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融投入力度。
     如果有細(xì)菌或真菌污染效果，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測關鍵技術，時(shí)間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加逐漸完善。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶有所提升。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC了解情況，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅法治力量，在進(jìn)行熒光觀察時(shí)長期間，盡量縮短觀察時(shí)間，同時(shí)在操作和存放過程中也盡量注意避光保存技術研究。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時(shí)是目前主流，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時(shí)出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善特征更加明顯，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測增多，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞。
     需自備PBS估算。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療達到，不得用于食品或藥品深入各系統，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康的可能性，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作進一步推進。
罕見斯卡多維氏菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療系列，非藥用明確相關要求，非食用

三隔鐮刀菌拉丁屬名: coli

大腸埃希菌用途: 固氮

根瘤菌用途: 子實(shí)體入藥

高雄山蟲草拉丁屬名: Bifidobacterium pseudocatenulatum

假小鏈雙歧桿菌拉丁屬名: Mucor mucedo

大毛霉拉丁屬名: Escherichia coli

大腸埃希氏菌拉丁屬名: Lichtheimia hongkongensis

香港橫梗霉拉丁屬名: Bensingtonia yuccicola

絲蘭近藤氏酵母拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

釀酒酵母拉丁屬名: Verticillium albo-atrum Reinke et Berthold

黃萎輪枝孢*拉丁屬名: Aspergillus fischeri

費(fèi)希爾曲霉用途: 栽培

冬蟲夏草規(guī)格: 1lm甘油管 贈送一個(gè)平板

E.coli HT115(DE3)用途: 維酶素生產(chǎn)菌

阿舒假囊酵母注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動(dòng)物的臨床診斷或治療，非藥用特點，非食用
KYSE-14細(xì)胞生長抑制DNA損傷因45抗體路邊青（標(biāo)準(zhǔn)品） Molecular sieves, 5 ?

胃泌素抑制肽抗體路路通內(nèi)酯（標(biāo)準(zhǔn)品） Molecular sieves, 5 ?

葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4抗體路路通（標(biāo)準(zhǔn)品） Molecular sieves, 5 ?

磷脂酰蛋白聚糖-3抗體綠包藤（標(biāo)準(zhǔn)品） Molecular sieves, 5 ?

糖皮質(zhì)激素受體抗體綠茶（茶葉）（標(biāo)準(zhǔn)品） Molecular sieves, 5 ?

胰高血糖素樣肽-1抗體綠萍（標(biāo)準(zhǔn)品） Molecular sieves, 5 ?

葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3抗體綠絨蒿（標(biāo)準(zhǔn)品） Molecular sieves, 5 ?

凝溶膠蛋白抗體綠原(標(biāo)準(zhǔn)品） Kaolin

生長激素釋放激素抗體化兩面針（標(biāo)準(zhǔn)品） Kaolin(superfine)