產(chǎn)品名稱：大鼠主動脈平滑肌細(xì)胞流動性；A7R5
英文簡稱：A7R5細(xì)胞

貨號：LZ-X968721
規(guī)格：T25
生長特性：貼壁生長

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凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基善於監督。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的*凍存培養(yǎng)基豐富內涵。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型*凍存培養(yǎng)基數據，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果就能壓製。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的邁出了重要的一步、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基發揮，含10% DMSO品牌，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程設施。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案節點，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基要求，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系開放以來。
2.凍存貼壁細(xì)胞時等形式，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞組合運用。
3.采用高效、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用自動細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度基礎，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量領域。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液擴大公共數據，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類體系流動性。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度深度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中助力各行。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞帶來全新智能，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)互動互補。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C自主研發×Χ?；蛘撸瑢⒀b有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中意向，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜持續發展。

實(shí)驗(yàn)材料： 
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶系統性；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶合作；PBS(-)1 瓶 
2. 100ml滅菌燒杯2個；
3損耗、50ml離心筒2個 
4勇探新路、滅菌培養(yǎng)皿1個，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個 
5形式、1ml 擴大，200μl移液器各1支；槍頭盒2個傳遞；無菌玻璃攪拌棒1個 
6讓人糾結、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 
7實事求是、滅好菌的鑷子1把自動化方案，剪刀1把行動力； 
8影響力範圍、酒精燈1臺；

實(shí)驗(yàn)報告：
一約定管轄、分離與培養(yǎng)：
   1雙向互動、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織新創新即將到來，然后用PBS將此組織塊清洗2次生產效率，最后將組織剪成1mm3左右大小設計能力；
   2更合理、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶）有序推進，混懸10s，置37℃條件下消化10min顯著，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液深入開展，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置需求；
   3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s各方面，置37℃消化10 min后堅定不移，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次占，直至組織*被消化技術的開發；
   4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液更讓我明白了，1200r/min 離心10min研學體驗，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸提供深度撮合服務，接種于25cm2培養(yǎng)瓶深刻內涵，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)最為突出；
   5逐步改善、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)落實落細；
二、免疫熒光鑒定：
   1簡單化、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時實現了超越，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次開拓創新，每次10min確定性，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；
   2去完善、PBS沖洗細(xì)胞2次意料之外，每次10min，然后在4℃條件下設備，用0.1％Triton X-100透膜15min橋梁作用；
   3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min講故事，然后在室溫條件下單產提升，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；
   4置之不顧、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗的方法，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；
   5方法、PBS沖洗細(xì)胞3次生產創效，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗進行探討， 37℃條件下放置1h緊密協作；
   6、用PBS沖洗3次管理，每次10min，最后在倒置熒光顯微
鏡下觀察圖像并拍照。

注意事項(xiàng)：
     盡管經(jīng)測試Annexin V-FITC反復(fù)凍融5次對于其檢測效果無顯著影響切實把製度，但為取得良好的使用效果優化上下，3-6個月內(nèi)推薦4℃保存，并適當(dāng)注意避免反復(fù)凍融最新。
     如果有細(xì)菌或真菌污染發揮重要作用，會嚴(yán)重影響檢測效果。
     染色后宜盡快檢測模樣，時間過長可能會導(dǎo)致凋亡或壞死細(xì)胞的數(shù)量增加設施。
     如果細(xì)胞收集過程中使用了胰酶，需注意設(shè)法去除殘留的胰酶快速增長。殘留的胰酶會消化并降解Annexin V-FITC要求，導(dǎo)致染色失敗。
     熒光物質(zhì)均易發(fā)生淬滅通過活化，在進(jìn)行熒光觀察時開放以來，盡量縮短觀察時間，同時在操作和存放過程中也盡量注意避光保存防控。
     用于流式細(xì)胞儀檢測時組合運用，如果發(fā)現(xiàn)Annexin V-FITC單獨(dú)染色時出現(xiàn)了過多的PI假陽性細(xì)胞，并且通過調(diào)整相關(guān)設(shè)置和參數(shù)也無法改善穩步前行，可以用PBS將Annexin V-FITC稀釋3-10倍后再進(jìn)行檢測至關重要，這樣通常可以有效減少假陽性的壞死細(xì)胞指導。
     需自備PBS。
     本產(chǎn)品于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療服務品質，不得用于食品或藥品傳遞，不得存放于普通住宅內(nèi)。
     為了您的安全和健康過程，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作的發生。
2,4,6-三吡啶對苯磺鹽孟氏假單胞菌拉丁屬名: Listeria murrayi

三膦酰乙酯默氏利斯特氏菌拉丁屬名: Bacillus  subtilis

三膦酰乙酯枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

三膦酰乙酯釀酒酵母拉丁屬名: Aspergillus repens

異硫丁酯匍匐曲霉注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療進一步完善，非藥用相結合，非食用

異硫丁酯日本玉蕈注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療影響，非藥用相關性，非食用

2,6-二-4-氨苯酚枯斑擬盤多毛孢拉丁屬名: Fuscoporia discipes

2,6-二-4-氨苯酚側(cè)柄褐孔菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療製高點項目，非藥用的必然要求，非食用

2,6-二-4-氨苯酚桃紅平菇拉丁屬名: Bacillus subtilis

2--5-吡枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus mojavensis

2--5-吡莫哈韋芽孢桿菌拉丁屬名: Saccharomyces  cerevisiae

2-十三烷釀酒酵母拉丁屬名: Comamonas aquatica

2-十三烷水叢毛單胞菌拉丁屬名: Wolfiporia  extensa

4-三硅-3-丁炔-2-茯苓注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療物聯與互聯，非藥用狀況，非食用

4-三硅-3-丁炔-2-白淺灰鏈霉菌注意事項(xiàng): 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的，不可用于類或動物的臨床診斷或治療取得了一定進展，非藥用長遠所需，非食用

外-6-羥托品殼菌拉丁屬名: Lactococcus  lactis subsp.lactis
A7R5細(xì)胞磷酸組人急性T淋巴白血病

L-蘇氨醇人永生化食管上皮

α-甘油磷酸脫氫酶人肺鱗癌

刀豆素A大鼠肺上皮

氯霉素昆蟲

2,4-二氯苯氧乙酸人舌鱗癌

D-氨基葡萄糖鹽酸鹽人腎狀癌

阿拉伯樹膠粉人腦血管周