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麥芽香肉桿菌PCR檢測試劑盒規(guī)格

產(chǎn)品簡介

麥芽香肉桿菌PCR檢測試劑盒規(guī)格
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更新時間:2021-03-14
訪問次數(shù):785
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注意事項:1.基礎程序信息化;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制集成技術;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學生產效率;8.PCR擴增產(chǎn)物創新的技術;9.PCR反應體系與反應條件。

 產(chǎn)品名稱

 麥芽香肉桿菌PCR檢測試劑盒規(guī)格

 英文名稱

 Carnobacterium maltaromaticumPCR

 貨號

 LZP6552

組成及試劑配制:
1更合理、酶標板:一塊(96孔)
2有序推進、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制改進措施。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml逐漸顯現,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解重要性,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋)體系,分別配制成200 U/L系統穩定性,100 U/L,50 U/L多種場景,25 U/L科技實力,12.5 U/L,6.25 U/L集中展示,3.12 U/L可靠保障,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中建設,混勻即可共同,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml在此基礎上。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5開展、 檢測稀釋液B:1×10ml帶動擴大。
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實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中簡單化,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制實現了超越,而不能從無到有,憑空合成開拓創新。這一小段序列就是你所要有設計的引物應用。可以是DNA也可以是RNA更優質,一般20多bp成就,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此項目,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP相對開放、dCTP、dGTP相對較高、dTTP各2mM
5.Taq酶
二信息化、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中創新內容。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋全方位,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應程序實踐者。將上述混合液稍加離心管理,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增豐富。一般:在93℃預變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次善於監督,zui后在72℃ 保溫7min大局。
3.結(jié)束反應,PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存數據。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油效率和安,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油邁出了重要的一步;否則產能提升,直接取5-10μl電泳檢測。
三新品技、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室發展空間。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果就此掀開,純化的方法越簡單越好能力。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應戴手套總之。
4.PCR試劑配制應使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水長足發展,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應該以大體積配制足了準備,試驗一下是否滿意規模設備,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性穩步前行。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子至關重要,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開自然條件,并且要充分混勻擴大公共數據。
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檢測步驟:
一經過、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)互動互補,冰上融化并振蕩混勻后核心技術體系,10000rpm離心10s。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)實際需求,每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量配套設備,加入一適當體積潔凈離心管中,充分混勻性能,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液優勢,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL設計,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內(nèi)品率。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號善謀新篇。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE開展面對面,請勿選擇ROX參比熒光供給。

 

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