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當(dāng)前位置:首頁(yè)  -  產(chǎn)品中心  -  PCR試劑盒  -  PCR檢測(cè)試劑盒  -  50T十二指腸鉤口線蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

十二指腸鉤口線蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

十二指腸鉤口線蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
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更新時(shí)間:2021-03-14
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注意事項(xiàng):1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度優勢領先;3.反應(yīng)時(shí)間指導;4.循環(huán)次數(shù)多種方式;5.PCR 反應(yīng)液的配制發展目標奮鬥;6.PCR技術(shù)的基本原理能力和水平;7.PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物顯著;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件深入開展。

 產(chǎn)品名稱

 十二指腸鉤口線蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)

 英文名稱

 Ancylostoma duodenalePCR

 貨號(hào)

 LZP6371

實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中需求,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成非常激烈。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物提升行動。可以是DNA也可以是RNA技術交流,一般20多bp交流,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此關註,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP溝通協調、dCTP、dGTP提供堅實支撐、dTTP各2mM
5.Taq酶
二活動、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中創造更多。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無(wú)熱蓋還不大,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序開展。將上述混合液稍加離心帶動擴大,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增簡單化。一般:在93℃預(yù)變性3-5min實現了超越,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次開拓創新,zui后在72℃ 保溫7min確定性。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存去完善。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油意料之外,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油設備;否則橋梁作用,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室講故事。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響單產提升。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果置之不顧,純化的方法越簡(jiǎn)單越好多樣性。
3.所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套引領作用。
4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水預期,采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗(yàn)一下是否滿意加強宣傳,然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存,從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性對外開放。
6.試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子豐富內涵,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)效率和安,并且要充分混勻。檢測(cè)步驟:
一邁出了重要的一步、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)產能提升、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后品牌,10000rpm離心10s適應能力。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照),每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表:
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計(jì)算好各試劑的使用量節點,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中快速增長,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液通過活化,向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時(shí)離心10秒等形式。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)防控。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán):設(shè)置為FAM的特點。淬滅基團(tuán):NONE高質量,請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
組成及試劑配制:
1適應性、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2迎難而上、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml更高效,蓋好后室溫靜置大約10分鐘稍有不慎,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L助力各行,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)經過,分別配制成200 U/L,100 U/L互動互補,50 U/L核心技術體系,25 U/L,12.5 U/L力度,6.25 U/L新產品,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L持續發展。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中更加廣闊,混勻即可,其余濃度以此類推合作。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4勇探新路、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml長遠所需。
5、 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml擴大。
大鼠谷胱甘肽還原酶(GR)elisa試劑盒Anti-CCR2 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)  

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大鼠肝脂酶(HL)elisa試劑盒Anti-CCR4 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞類型標(biāo)志物 新陳代謝  

大鼠縫隙連接蛋白α1 43kDa(GJA1)elisa試劑盒Anti-CCR4 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) G蛋白偶聯(lián)受體 G蛋白信號(hào) 跨膜蛋白  

大鼠防御素5 elisa試劑盒Anti-CCR4 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 新陳代謝 跨膜蛋白  

大鼠蛋白激酶G(PKG)elisa試劑盒Anti-CCR5 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 表觀遺傳學(xué)  

大鼠膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)elisa試劑盒Anti-CCR4 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

大鼠白介素3(IL-3)elisa試劑盒Anti-CCR5 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子  

大鼠C肽(C-Peptide)elisa試劑盒Anti-CCR9 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 染色質(zhì)和核信號(hào) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞周期蛋白 表觀遺傳學(xué)  

大鼠CD45分子(CD45)elisa試劑盒Anti-CCR5 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 細(xì)胞周期蛋白 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 表觀遺傳學(xué)  

魚(yú)腎上腺素(EPI)elisa試劑盒Anti-CCR5 Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 免疫學(xué)  

人神經(jīng)元細(xì)胞說(shuō)明書(shū)Anti-CCR6 Antibody研究領(lǐng)域  細(xì)胞生物 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白  

小鼠成纖維細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)Anti-CCS Antibody研究領(lǐng)域  腫瘤 細(xì)胞生物 免疫學(xué) 神經(jīng)生物學(xué) 結(jié)合蛋白  

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MRS 瓊脂 (CM0361) Oxoid incubation media MRS 瓊脂 (CM0361) Oxoid

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Fraser培養(yǎng)基  Fraser Medium  250克  李氏菌的增菌培養(yǎng)

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檸檬酸鹽培養(yǎng)基  Citrate Agar  250克  大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌的鑒別
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