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溫和氣單胞菌PCR檢測試劑盒規(guī)格

產品簡介

溫和氣單胞菌PCR檢測試劑盒規(guī)格
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更新時間:2021-03-14
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注意事項:1.基礎程序業務指導;2.擴增溫度和延伸溫度;3.反應時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應液的配制合作關系;6.PCR技術的基本原理;7.PCR的反應動力學研學體驗;8.PCR擴增產物發揮作用;9.PCR反應體系與反應條件。

 產品名稱

 溫和氣單胞菌PCR檢測試劑盒規(guī)格

 英文名稱

 Aeromonas sobriaPCR

 貨號

 LZP6348

組成及試劑配制:
1系統、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶規模,請臨用前15分鐘內配制進一步。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘多種,同時反復顛倒/搓動以助溶解發行速度,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋)強大的功能,分別配制成200 U/L積極拓展新的領域,100 U/L,50 U/L與時俱進,25 U/L應用,12.5 U/L,6.25 U/L更優質,3.12 U/L成就,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中項目,混勻即可相對開放,其余濃度以此類推。
3綜合運用、 樣品稀釋液:1×20ml相貫通。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml脫穎而出。
5系統、 檢測稀釋液B:1×10ml。
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實驗過程:
一技術發展、試劑準備
1. DNA模板
2.對應目的基因的特異引物(在PCR反應中重要的作用,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制,而不能從無到有自動化,憑空合成重要的意義。這一小段序列就是你所要有設計的引物集成。可以是DNA也可以是RNA關註度,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此穩中求進,擴增不同的基因需要設計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP橫向協同、dCTP、dGTP不同需求、dTTP各2mM
5.Taq酶
二業務指導、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中發展空間。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR儀有無熱蓋創造性,不加或添加石蠟油。
2.調整好反應程序就此掀開。將上述混合液稍加離心能力,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增總之。一般:在93℃預變性3-5min長足發展,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次足了準備,zui后在72℃ 保溫7min規模設備。
3.結束反應,PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存信息化技術。
4.PCR的電泳檢測:如在反應管中加有石蠟油領先水平,需用100μlLuFang進行抽提反應混合液,以除去石蠟油責任製;否則效率,直接取5-10μl電泳檢測。
三雙重提升、注意事項
1.PCR反應應該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進行設立一個的PCR實驗室增強。
2.純化模板所選用的方法對污染的風險有極大影響。一般而言結果,只要能夠得到可靠的結果戰略布局,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應該沒有核酸和核酸酶的污染規則製定。操作過程中均應戴手套講道理。
4.PCR試劑配制應使用zui高質量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌表現明顯更佳。
5.試劑都應該以大體積配制更加廣闊,試驗一下是否滿意優化服務策略,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性示範。
6.試劑或樣品準備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子優勢,玻璃器皿應洗滌干凈并高壓滅菌。
7.PCR的樣品應在冰浴上化開,并且要充分混勻品率。
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結合珠蛋白/觸珠蛋白抗體Foliamenthoic acid中文名:別名:8-Hydroxy-2,6-dimethyl-2,6-octadieic acid分子式:C10H16O3

高遷移率族蛋白B4抗體Bombiprene中文名:別名:分子式:C43H70O

組蛋白去乙醪粩喟l展;?/font>2抗體環(huán)烯醚萜

乙肝病毒Large S蛋白抗體10-Hydroxyligstroside中文名:別名:分子式:C25H32O13
檢測步驟:
一結構、 試劑的準備
從試劑盒中取出熒光PCR反應液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)模式,冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s集聚效應。
設所需要的PCR反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照)貢獻,每個測試反應體系配制如下表:
試劑 每個反應加入的量 N個反應加入的量
熒光PCR反應液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當體積潔凈離心管中提升,充分混勻持續,10000rpm離心10s,向設定的N個PCR反應管中分別加入15μL熒光PCR反應液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL高品質,10000rpm瞬時離心10秒。
7.2 qPCR反應條件
將各反應管放入定量PCR儀器的反應槽內互動講。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸時收集熒光信號統籌。報告基團:設置為FAM。淬滅基團:NONE支撐能力,請勿選擇ROX參比熒光產品和服務。

 

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