大鼠ELISA試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法基礎。用抗體包被于酶標板上領域，實驗時樣品或標準品中的抗原會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去要素配置改革。依次加入生物s化物的抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗體與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合無障礙、生物s與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復合物體系，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)高產，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色註入新的動力，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值帶動產業發展，抗原濃度與OD450值之間呈正比貢獻力量，通過繪制標準曲線計算出樣品中指標的濃度。
大鼠ELISA試劑盒試驗時老是失敗的幾個因素分析：
一具有重要意義、低信號強度
如果ELISA讀數(shù)低于吸光度下限預判，且目標樣本濃度超出標準曲線范圍，則進行分析的樣本濃度可能太低有力扭轉，或者儀器所能分析的樣本檢測最佳條件可能未被滿足調解製度。在這種情況下，樣本所產(chǎn)生的檢測信號應該需要被級聯(lián)放大形式。
解決方案：
1.增加抗體的孵育時間覆蓋範圍。如果在室溫下孵育您的抗體2小時后的實驗結(jié)果并不理想，那么可以嘗試在4℃孵育過夜功能。如此前沿技術，可允許抗原抗體大程度上的結(jié)合，并能擴大ELISA中的反應信號積極性。
2.增加二抗-酶結(jié)合物的濃度深入交流。ELISA中的E代表酶（通常是辣根過氧化物酶，HRP）性能，它與底物（通常是TMB）反應后可產(chǎn)生鮮艷的藍色動力。因而不斷豐富，將HRP濃度提高50％或?qū)⑵浼颖叮瑒t會產(chǎn)生更強的顏色多種方式，易于檢測同時。
3.充分避光，以保護TMB基質(zhì)不受光照影響臺上與臺下，并確保其能最大限度地發(fā)揮其性能幅度。考慮到TMB對光線非常敏感效高性，因而在黑暗中進行ELISA平板的顯色反應會產(chǎn)生更強的信號各有優勢。
二、重復性不好
同一個樣本間的各個復孔的讀數(shù)有顯著性差異重要的作用。
解決方案：
1.加樣量多少不一有序推進，操作時間長短不一。重復同一樣本時顯著，加樣量與加樣時間理應相同深入開展，同時也應注意移液器的校準。加樣后可輕微晃動酶標板使反應液充分混合緊迫性。
2.樣本應保證一致質生產力、無污染，并應該由同一名操作人員進行操作非常激烈。
3.精密度測定方法不標準提升行動，此時理應采用正確的方法進行操作。
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更新時間：2022-11-14
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