熒光-PCR法定量技術一種新的核酸定量技術。該技術是在常規(guī)PCR基礎上加入熒光標記探針或相應的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的不負眾望。其原理隨著PCR反應的進行共同學習,PCR反應產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強度也等比例增加推動並實現。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強度信號,這樣我們就可以通過熒光強度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化更加完善,從而得到一條熒光擴增曲線圖薄弱點。
熒光-PCR法的應用十分廣泛,舉例說明一下:
1.核酸定量分析
對傳染性疾病進行定量定性分析精準調控,病原微生物或病毒含量的檢測,比如甲型H1N1流感效高,轉基因動植物基因拷貝數(shù)的檢測建設應用,RNAi基因失活率的檢測等。
2.基因表達差異分析
比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達差異(如藥物處理廣度和深度、物理處理應用的因素之一、化學處理等),特定基因在不同時相的表達差異以及cDNA芯片或差顯結果的確證性能。
3.SNP檢測
檢測單核苷酸多態(tài)性對于研究個體對不同疾病的易感性或者個體對特定藥物的不同反應有著重要的意義,因分子信標結構的巧妙性,一旦SNP的序列信息是已知的強化意識,采用這種技術進行高通量的SNP檢測將會變得簡單而準確聽得進。
4.甲基化檢測
甲基化同人類的許多疾病有關,特別是癌癥覆蓋。一種技術在擴增之前先處理DNA服務體系,使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影響重要的作用,用特異性的引物和Taqman探針來區(qū)分甲基化和非甲基化的DNA特點,這種方法不僅方便而且靈敏度更高。
5.產(chǎn)前診斷
人們對遺傳性物質改變引起的遺傳性疾病還無法治療搶抓機遇,到目前為止綠色化發展,還只能只能通過產(chǎn)前監(jiān)測,減少病嬰出生結論,以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生應用創新,如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA足夠的實力,用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法和諧共生,易為孕婦所接受。
6.病原體檢測
采用熒光-PCR檢測技術可以對淋球菌全面闡釋、沙眼衣原體用上了、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒適應性強、單純皰疹病毒的特性、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒能力建設、流感病毒高效、結核分枝桿菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定基礎。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高領域、取樣少、快速簡便等優(yōu)點。