PCR擴(kuò)增試劑盒提供DNA高保真擴(kuò)增所需要的基本試劑講理論。DNA擴(kuò)增時(shí)，用戶需要自行準(zhǔn)備模板和擴(kuò)增所需要的引物智能設備。高溫嗜熱Pfu DNA聚合酶主要用于對(duì)保真度要求非常高的DNA擴(kuò)增解決問題，這些擴(kuò)增要求擴(kuò)增的產(chǎn)物中不能出現(xiàn)突變等錯(cuò)誤。Taq DNA聚合酶的擴(kuò)增性能很強(qiáng)不要畏懼，但是用Taq擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物中有難以避免的隨機(jī)突變導向作用。Pfu DNA聚合酶除了5′-3′的聚合特性外，還有3′-5′端外切酶活性作用，具有校正DNA擴(kuò)增過(guò)程中突變重要意義。Pfu DNA的長(zhǎng)片段擴(kuò)增的能力不及Taq DNA聚合酶，用戶如果用于長(zhǎng)鏈PCR擴(kuò)增意見征詢，可選用Long Taq或者Taq Plus DNA聚合酶組成部分。
PCR擴(kuò)增試劑盒的實(shí)驗(yàn)事項(xiàng)說(shuō)明：
1.樣本上多重PCR平臺(tái)可以做的樣本包括血液、唾液集聚、口腔拭子高效化，在實(shí)驗(yàn)中，對(duì)于DNA投入量要求不是很高新的動力，根據(jù)不同項(xiàng)目需求完成的事情，DNA投入量的范圍在100 pg-100 ng之間。
2.進(jìn)行PCR反應(yīng)前可將所有g(shù)DNA的濃度稀釋到同一濃度為產業發展，并轉(zhuǎn)移到PCR八聯(lián)管中研究成果，一方面是便于排槍操作，另一方面是加入相同起始量的gDNA穩定，這樣可降低最終文庫(kù)的濃度差異機製性梗阻，便于混合文庫(kù)。
3.大多數(shù)情況下引物是一管廣泛關註，操作相當(dāng)方便改造層面；當(dāng)目標(biāo)區(qū)域是外顯子或者是其他連續(xù)區(qū)域時(shí)，我們會(huì)把引物分裝為二管服務好，分別命名Primer pool T1與Primer pool T2首次，這時(shí)需要第二輪PCR前把產(chǎn)物合并，再進(jìn)行下一步反應(yīng)效高化。
4.執(zhí)行多重PCR反應(yīng)時(shí)，特別是樣本量多的情況下反應能力，可以將T1設(shè)為一組部署安排，T2設(shè)為一組競爭激烈，便于制備反應(yīng)試劑混合液和排槍操作；并把解凍好的試劑放置在冰盒上效果，在冰盒上進(jìn)行加樣操作學習。
5.實(shí)驗(yàn)中可在PCR管壁上和管蓋上同時(shí)進(jìn)行反應(yīng)編號(hào)標(biāo)記，防止高溫或其他原因?qū)е掠浱?hào)消失改善，避免后續(xù)產(chǎn)物混合操作失誤，造成樣本交叉污染。
6.第二輪PCR后推廣開來，因?yàn)锽試劑比較粘稠空白區，在清洗純化的時(shí)候不能吸走所有試劑，可以剩余5-10μl取得顯著成效，否則會(huì)把磁珠一起吸走處理方法，造成樣品的損失，導(dǎo)致產(chǎn)物回收率下降責任。
實(shí)驗(yàn)完成后服務，正常文庫(kù)濃度處于5-30 ng/μl，而片段長(zhǎng)度一般在280-460 bp之間持續向好，且主峰前后無(wú)雜峰舉行，就可以進(jìn)行測(cè)序了。
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更新時(shí)間：2021-07-08
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