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氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量測定操作步驟:
1.標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設(shè)標準品孔10孔措施,在第一、第二孔中分別加標準品100μl服務效率,然后在第一、第二孔中加標準品稀釋液50μl求得平衡,混勻;然后從第一孔道路、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔面向,再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl空間廣闊,混勻合作關系;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五研學體驗、第六孔中結構不合理,再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul深刻內涵,混勻競爭力;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七逐步顯現、第八孔中作用,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl近年來,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九事關全面、第十孔中交流等,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉發展目標奮鬥。
2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑自動化裝置,其余各步操作相同)、待測樣品孔規劃。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl關規定,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部應用前景,盡量不觸及孔壁相對開放,輕輕晃動混勻重要方式。
3.溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用相貫通。
5.洗滌:小心揭掉封板膜增產,棄去液體,甩干系統,每孔加滿洗滌液的方法,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次方法,拍干生產創效。6.加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外進行探討。
7.溫育:操作同3集成。
8.洗滌:操作同5。
9.顯色:每孔先加入顯色劑A50μl關註度,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10.終止:每孔加終止液50μl穩中求進,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)橫向協同。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)再獲。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行穩定性。