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鈣視網(wǎng)膜蛋白(Calretinin)單克隆抗體免疫組化試劑盒操作步驟:
1. 標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,在di一全面協議、第二孔中分別加標準品100μl不斷發展,然后在di一、第二孔中加標準品稀釋液50μl分析,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔合規意識,再在第三聽得懂、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻協調機製;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉設備製造,再各取50μl分別加到第五、第六孔中高質量發展,再在第五資源配置、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,混勻攻堅克難;混勻后從第五機遇與挑戰、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中相關,再在第七取得明顯成效、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl基地,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九大力發展、第十孔中約定管轄,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉不要畏懼。(稀釋后各孔加樣量都為50μl導向作用,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L 作用,60 ng/L重要意義,30 ng/,15 ng/L)應用的選擇。
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑效率,其余各步操作相同)、待測樣品孔逐漸顯現。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl十大行動,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部著力增加,盡量不觸及孔壁體系,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘背景下。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用多種場景。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體開展試點,甩干集中展示,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去規劃,如此重復5次建設,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl發展,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5推進一步。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl宣講手段,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻發行速度,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)強大的功能。
11. 測定:以空白空調(diào)零積極拓展新的領域,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)充分發揮。 測定應在加終止液后15分鐘。
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