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小鼠8羥基脫氧鳥(niǎo)苷(8-OHdG)檢測(cè)ELISA試劑盒的間接法:
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml推動,每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜高效流通。
2.次日洗滌3次傳遞。
3.加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌讓人糾結。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照)于反應(yīng)孔中發揮效力,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml全面革新,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,一遍用DDW洗滌穩定發展。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml方便,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml更好。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上基石之一,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng)服務水平,陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺線上線下,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”能力建設、“-”號(hào)表示知識和技能。也可測(cè)O·D值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色醒悟,則410nm)處進行部署,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值生產體系,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性重要作用。