豬骨髓B淋巴細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基傳代 ：

1) 當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到 85%以上時(shí)，可進(jìn)行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)更為一致，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基堅定不移；

3) 向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后落地生根，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤(rùn)到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積技術的開發，吸棄 PBS成效與經驗；

4) 向瓶?jī)?nèi)加入消化液 1ml，浸潤(rùn)底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min溝通協調；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞是否變圓飄起拓展，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管發展；

① 準(zhǔn)備一個(gè)無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細(xì)胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）推進一步；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶開展，95%左右細(xì)胞脫帶動擴大。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準(zhǔn)備兩個(gè)新的 T-25 培養(yǎng)瓶簡單化，各加入 4ml培養(yǎng)基實現了超越。

8) 離心完成后，棄上清開拓創新，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細(xì)胞確定性，將重懸后的細(xì)胞轉(zhuǎn)入 2 個(gè) T-25 培養(yǎng)瓶，每個(gè)培養(yǎng)瓶各 1ml去完善；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶意料之外，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃設備，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)橋梁作用。