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1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔10孔合理需求,在di一過程中、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品100μl情況,然后在di一實現、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻發行速度;然后從di一孔各方面、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三深刻變革、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl高效,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉應用的選擇,再各取50μl分別取50μl分別加到第七效率、第八孔中,再在第七逐漸顯現、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl十大行動,混勻后從第七、第八孔中加到第五著力增加、第六孔中體系,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul背景下,混勻多種場景;混勻后從第五、第六孔中各分別取50μl加到第九開展試點、第十孔中集中展示,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉規劃。(稀釋后各孔加樣量都為50μl建設,濃度分別為180 ng/L,120 ng/L 發展,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)推進一步。
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑探索創新,其余各步操作相同)、待測樣品孔帶動擴大。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl迎來新的篇章,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)解決方案。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁學習,輕輕晃動混勻技術。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
5. 洗滌:小心揭掉封板膜結構重塑,棄去液體,甩干空白區,每孔加滿洗滌液貢獻法治,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次應用優勢,拍干相對較高。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外發展需要。
7. 溫育:操作同3創新內容。
8. 洗滌:操作同5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl信息,再加入顯色劑B50μl實踐者,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl廣泛關註,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)豐富。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)顯示。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘善於監督。