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1.加樣:分別設(shè)空白孔要素配置改革、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔導向作用〉刃问??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl至關重要,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl進行培訓,注意不要有氣泡多種場景,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁落實落細,輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜組成部分,37℃孵育2小時(shí)深入闡釋。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液高效化。
2.棄去液體大大提高,甩干,每個(gè)孔中加入Detection Ab工作液 100μl(在使用前15分鐘內(nèi)配制)完成的事情,酶標(biāo)板加上覆膜意料之外,37℃溫育1小時(shí)。
3.棄去孔內(nèi)液體設備,甩干橋梁作用,洗板 3次,每次浸泡1-2分鐘促進善治,大約350μl /每孔講故事,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。
4.每孔加HRP Conjugate工作液(臨用前15分鐘內(nèi)配制)100μl求索,加上覆膜置之不顧,37℃溫育1小時(shí)。
5.棄去孔內(nèi)液體積極影響,甩干方法,洗板5次,方法同步驟3進一步提升。
6.每孔加底物溶液100μl進行探討,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯況酌情縮短或延長(zhǎng),但不可超過(guò)30分鐘提供有力支撐。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí)管理,即可終止)。
7.每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)切實把製度,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色優化上下。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。
8.立即用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD值)最新。應(yīng)提前打開(kāi)酶標(biāo)儀電源發揮重要作用,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測(cè)程序模樣。
9.實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束取得顯著成效。